利用模擬酶催化顯色和等溫核酸擴增反應(yīng)檢測特定序列DN

http://173kt.com 來源：分析化學(xué)期刊 時間：2014-03-07

　　基于血紅素(Hemin)與G鄄四聯(lián)體(G4)所形成模擬酶的催化作用,結(jié)合等溫指數(shù)擴增反應(yīng)(IEX鄄PAR),建立了特定序列DNA的顯色檢測方法。目標DNA引發(fā)IEXPAR,通過設(shè)計模板序列,IEXPAR產(chǎn)生大量富含鳥嘌呤的單鏈DNA,在K+存在時,該單鏈DNA可形成G4結(jié)構(gòu),G4可以與Hemin結(jié)合形成具有過氧化物酶活性的模擬酶(Hemin鄄G4),Hemin鄄G4催化H2 O2氧化2,2鄄聯(lián)氮鄄二(3鄄乙基鄄苯并噻唑鄄6鄄磺酸)二銨鹽(ABTS),使體系顏色發(fā)生變化,反應(yīng)產(chǎn)物最大吸收波長為421 nm。對顯色反應(yīng)體系中的實驗參數(shù)進行了優(yōu)化,包括Hemin濃度、ABTS濃度、H2 O2濃度、IEXPAR時間和顯色反應(yīng)時間。在最佳條件下,所建立的體系可以簡便、快速檢測0. 1 ~10 nmol/ L的目標DNA分子,且本方法能夠很好地區(qū)分單個堿基的差別,具有良好的特異性。